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1简述免疫荧光细胞化学的原理。

原理：免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。

免疫荧光细胞化学方法的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。方法具体种类有直接法、间接法、夹心法和补体法等。

荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光，化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。因此，化学发光反应中反应过程必须产生足够的激发能是产生发光效应的重要条件。

2免疫荧光实验的步骤注意事项?

进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。

细胞铺板：将细胞以合适的密度（注意：一般情况下，细胞密度不要太高，不要叠在一起，否则干扰最后拍片）接种于玻底培养皿（b小编用的是confocal皿：如下图）中，进行转染，加药诱导等实验处理。

细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

晶安生物细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。

3基质胶上怎样做细胞免疫荧光试验

目前有专用的试剂：荧光染料和caspase-3的底物结合，加入细胞培养液，细胞可以自由摄入。进入细胞后，底物被活化的caspase3或者7降解后，释放的荧光染料进入细胞核，染色DNA。

①用棉签擦去基质胶和上室内的细胞②染色：采用0.1%结晶紫染色。这种方法有如下优势：（1）.不需要固定细胞，直接染色即可。（2）.配制简单方便。使用前2h在冰水混合物中解冻，用冰水浴一直保持温度在4度左右。

一）细胞准备 用于免疫荧光实验的细胞可以是直接生长在盖玻片上的贴壁细胞，也可以是经过离心后涂片的悬浮细胞或者是将取自体内的组织细胞悬液离心后涂片。

同时请记住，您的培养方式也要与您的成像平台相契合，比如，正置显微镜通常需要盖玻片上的细胞，而倒置显微镜能够成像多孔板中的细胞。在开始免疫荧光操作之前，需要经常检查细胞的健康状况和汇合度。

那就是细胞膜定位。如果染出来在DAPI周围到处都是，那就是包浆定位；如果染出来和DAPI是完全merge的，那就是细胞核定位。至于定量和半定量可以通过软件分析荧光强度，这个不麻烦。

不过检测迁移和侵袭的实验方法还是存在差异， 侵袭检测需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。

4免疫组化和免疫荧光的区别有哪些?它们相应的服务有哪些?

多重免疫组化（mIHC）：主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大（Tyramide signal amplification）是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。

它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。

当然有区别。是免疫领域的两种方法。免疫组化是未必发光，免疫荧光一定会发荧光。这是最基本的区别。建议你去百度下这两个词条。

免疫荧光的一抗浓度一般高于免疫组化的一抗浓度，但是也要看具体情况：因此免疫荧光一般采取二步法，而免疫组化中有biotin放大这一步。所以建议免疫荧光的时候重新摸索浓度，要是采用三步法可能不需要摸索了。

5细胞免疫荧光,求助

1、取出细胞复温至室温约1h。冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。配制荧光标记二抗：Ab50598 Goat anti-rabbit IgG（H&L） TRITC，用PBS或FBS配制。

2、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

3、抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

4、首先你应该确认老鼠是不是转基因老鼠，会不会有自发荧光的产生。其次，二抗就是荧光染料，只要加了二抗，就会有荧光的产生，所以需要在加完二抗后用PBS洗5次，充分将多余二抗洗掉，避免在拍片时产生躁点影响实验结果。

5、定量是可以的，要做western blot和ELISA，但也只是相对定量，不是绝对定量，把你检测的结果保存一张比较好的图片，背景清晰，结果稳定的。

6请教:细胞免疫荧光

免疫荧光是一种现代化的检测方法，是通过荧光技术来检测某个物质中是否含有特定的抗原或抗体。

免疫荧光红色和绿色是在细胞或组织中使用荧光标记物进行染色的技术，用于生物、医学和免疫学领域的研究和诊断中，红色和绿色荧光指的是标记物发出的荧光颜色。标记物是荧光染料、荧光蛋白或抗体所结合的荧光物质。

免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还可以用软件做相对定量分析。免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些。

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